Protocol for high-fidelity Fixed STORM Sample
Protocol for high-fidelity Fixed STORM Sample
1, 追求洁净的细胞内背景,应用 Sunbloss®样品基质净化液,37 ℃孵育活细胞 10s,吸去净化液,立即进行固定;
2, 高保真微管固定,使用Sunbloss®️高保真固定液-微管37 ℃固定细胞 10min;
3, 使用2ml Sunbloss®️超纯制样PBS简短的清洗细胞 3 次;
4, 压制背景荧光,使用2ml配置好的 Sunbloss®️自发荧光抑制剂,在室温下孵育样本 7min,使用侧摆摇床辅助交换液体;
5, 使用2ml Sunbloss®️超纯制样PBS简短的清洗细胞 3 次;
6, 封闭抗体非特异性结合位点,使用 50ul 配置好的Sunbloss®️封闭打孔液, 同时使用 Sunbloss®️制样伴侣-贴壁样本辅助样本的孵育,室温下孵育细胞 30 min;
7, 使用 Sunbloss®️制样伴侣-贴壁样本辅助一抗孵育,保持湿润环境,室温孵育 1 小时。一抗选择 beta-tubulin E7 mouse;
8, 使用 2ml Sunbloss®️超纯制样PBS清洗一抗,5min 一次,清洗3次,使用侧摆摇床辅助交换液体;
9, 抵御非特异性荧光染料结合,使用25ul Sunbloss®️荧光净化增强液,同时使用 Sunbloss®️制样伴侣-贴壁样本辅助样本的孵育,室温孵育样本 30min;
10, 使用 Sunbloss®️制样伴侣-贴壁样本辅助二抗孵育。保持湿润环境,室温孵育 1 小时。二抗选择 abberior FLUX680 goat-anti-mouse IgG。
11, 使用 2ml Sunbloss®️超纯制样PBS清洗二抗,5min 一次,清洗3次,使用侧摆摇床辅助交换液体;
12, 使用 Sunbloss®️超分辨光镜级PFA-16%, 预制成 4%浓度,取 500ul 浸没样品进行后固定,时间10min。
13, 在成像时,使用Sunbloss® SMLM Imaging STORM Buffer,进行 STORM 成像。
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